饲料增加剂是指在饲料临盆加工、行使进程中增加的少数或微量物资,在饲估顶用量很少但影响显著。防腐剂由于具备抵制和杀灭微生物增殖的影响而被遍及运用于食物产业中。今朝我国同意在食物中行使的防腐剂有十几种,此中双乙酸钠、丙酸钙、山梨酸钾和苯丙酸钠在饲估中运用较广大,其机关式见图1。双乙酸钠(sodiumdiacetate)是一种性质波动的新式食物饲料防霉剂、酸味剂和改造剂,具备高效防霉、防腐、保鲜、增进养分价钱等成果,运用平安性极高,现遍及运用于畜禽饲料。丙酸钙(calciumpropionate)是我国同意行使的食物防腐剂及防霉剂,对霉菌、酵母菌及细菌等具备遍及的抗菌影响山梨酸钾(potassiumsorbate)是一种国际卫生机关引荐的高效平安的防腐保鲜剂,它对食物韵味无不良影响,能参加人体推陈出新,生理平安性高.苯甲酸是急迫的酸型饲料防腐剂,即使很多国度因其毒性较大,已不准行使该类盐,但由于苯甲酸及其钠盐的价钱低廉,在我国仍做为重要食用的防腐剂之一。
今朝,双乙酸钠、丙酸钙、苯甲酸钠、山梨酸钾的重要探测法子是气相色谱法,高效液相色谱法,毛细管电泳法以及离子色谱法等。现有的文件中同时探测双乙酸钠、丙酸钙、苯甲酸钠、山梨酸钾4种防腐剂的高效液相色谱法子即便采纳梯度洗脱,但剖析光阴仍较长(30min)。本协商行使C18反相色谱柱,经过对缓冲盐的品种、浓度、pH值等成分的查核协商,确立了一种简朴疾速测定饲料增加剂中的4种防腐剂的等度洗脱高效液相色谱法子,特为实用于饲料增加剂的品质监控。
1 实习部份
1.1 仪器与试剂
Waters型高效液相色谱仪,配有Waters型紫外探测器;双光束紫外看来分光光度计,型号TU-;pH/Lon酸度计,型号pH,精度0.01个pH单元;剖析天平,型号AL-;超声波洗濯仪,型号SKHP。
丙酸钙、山梨酸钾和苯甲酸钠准则品。双乙酸钠。磷酸二氢钾为剖析纯。磷酸、甲醇均为色谱纯。实习用水均为超纯水。实习所用饲料增加剂样本来自本地饲料厂。
1.2 实习法子
1.2.1 色谱前提
色谱柱:HypersilODSC18反相色谱柱(5μm;×4.6mm);崎岖相:0.02mol/L磷酸二氢钾-甲醇(65∶35,V/V);流速:1.0mL/min;探测波长:nm;进样量:20μL;柱温:25℃。
1.2.2 溶液的制备
准则溶液的配制:称取18.7mg双乙酸钠,39.0mg丙酸钙,7.0mg苯甲酸钠,9.0mg山梨酸钾置于25mL容量瓶中,加约20mL水,熔解,用磷酸调pH值为2.5,稀释至刻度,获得4种准则物资的混杂储藏液。
供试品溶液:取0.5g(精准至0.1mg)混杂平均后的样本至于50mL容量瓶,列入40mL水熔解,摇匀震撼,超声30min,磷酸调pH值为2.5后加水定容至50mL,摇匀。所用样本剖析前用0.45μm滤膜过滤。
2 完毕与议论
2.1 色谱前提的取舍
2.1.1 探测波长确实定
在~nm的波长规模内,对双乙酸钠、丙酸钙、苯甲酸钠及山梨酸钾举办光谱扫描,所得的紫外谱图如图2所示。从图2可知,4种物资的最大汲取波长离别为:山梨酸钾nm,苯甲酸钠nm,双乙酸钠nm,丙酸钙nm。由于双乙酸钠和丙酸钙的最大汲取均在远紫外区,不宜探测,由国度准则(GB/T—、GB/T—)可知,食物中双乙酸钠、丙酸钙的探测波长均为nm。归纳思考双乙酸钠双、丙酸钙、山梨酸钠和苯甲酸钠均有较大的汲取波长,本协商取舍汲取波长为nm。
2.1.2 缓冲盐品种的取舍
行使甲醇为有机相,缓冲盐溶液离别为10%0.02mol/L乙酸铵、磷酸二氢钾、磷酸氢二铵。实习完毕讲明,磷酸二氢钾-甲醇溶液能够很好地离别4种物资,最后本实习取舍磷酸二氢钾做为缓冲盐溶液。
2.1.3 缓冲盐溶液pH值的取舍
行使甲醇为有机相,离别调整磷酸二氢钾缓冲盐溶液的pH值为2.5、3.0、3.5、4.0、4.5、5.0、5.5、6.0、7.0,查核其离别环境。完毕显示,pH值小于4.0时,双乙酸钠和山梨酸钠不能完整离别;pH值增大到4.5时,苯甲酸钠和山梨酸钾双峰能够完整离别,双乙酸钠和丙酸钙两峰离别情景优秀;当pH值大于5.0后,双乙酸钠和丙酸钙不能完整离别。是以取舍缓冲溶液的pH值为4.5。
2.1.4 崎岖比拟例的取舍
查核崎岖相中KH2PO4与甲醇比例为80∶20、75∶25、70∶30、65∶35、60∶40时,4种物资的离别环境。完毕讲明,跟着崎岖相中甲醇比例的增大,4种物资的保存光阴逐步收缩,当甲醇比例到达35%时,四种物资的出峰光阴最短并且能够完整离别,是以取舍KH2PO4∶甲醇(V/V)为65∶35。
2.1.5 准则和样本pH值的取舍
当准则和样本管教后直接进样时,双乙酸钠裂分为2个峰。当调整准则和样本pH值为酸性时,发觉当pH值小于3时,双乙酸钠出峰一般,是以取舍准则和样本末了行使磷酸调整pH值为2.5。
综上所述,最好离别前提为崎岖相:0.02mol/L磷酸二氢钾(pH值不调)-甲醇(65∶35,V/V),准则和样本的pH值为2.5。
2.2 法子考证
2.2.1 线性干系
离别配制一系列不同浓度的双乙酸钠、丙酸钙、山梨酸钾和苯丙酸钠混杂准则溶液,在最好色谱前提下测定,以峰面积A对浓度c做图,绘制准则弧线,获得4种物资的线性规模和回归方程,如表1所示。
2.2.2 检出限与定量限
取4种探测物比较品准则溶液稀释到符合浓度,以最好色谱前提进样,以信噪比的3倍和10倍祈望检出限和定量限。完毕测定如表1。现有的文件同时探测食物中双乙酸钠、丙酸、苯甲酸、山梨酸4种防腐剂的高效液相色谱法子,其检出限离别为1.7,1.0,0.44,0.45mg/mL,均高于本协商所得的检出限。
2.2.3 精细度
对饲料增加剂样本举办管教后,日内和白日持续进样5次,祈望日内精细度和白日精细度,测定完毕如表2所示。
2.3 样本测定
在最优的实习前提下,对4个已知的不同批次的饲料增加剂样本依据实习法子举办管教后举办测定,将探测完毕转折为品质百分含量,探测完毕如表3所示。其准则和样本谱图如图3所示。
2.4 回收率
取舍一个批次(批号:)的样本,列入已知3个浓度水准的准则溶液,依据样本管教环节管教样本后进样,完毕如表4所示。从表4中看出,双乙酸钠、丙酸钙、苯甲酸钠和山梨酸钾的平均回收率离别为91.8%、87.5%、92.3%和83.4%。解释本法子测定饲料增加剂中的4种增加剂回收率优秀。
3 结 论
本协商确立了一种高效疾速的HPLC法子,可同时测定饲料增加剂中的双乙酸钠、丙酸钙、苯甲酸钠和山梨酸钾,4种物资在11min内能够完整离别。该法子样本管教简朴,离别效率较高,灵巧度高,是举办饲料增加剂探测的一种灵验法子。
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