高效液相色谱仪测定食品中苯甲酸山梨酸和

1范围

本标准规定了食品中苯甲酸、山梨酸和糖精钠测定的方法。

本标准第一法适用于食品中苯甲酸、山梨酸和糖精钠的测定;第二法适用于酱油、水果汁、果酱中苯甲酸、山梨酸的测定。

2原理

样品经水提取,高脂肪样品经正己烷脱脂、高蛋白样品经蛋白沉淀剂沉淀蛋白,采用液相色谱分离、

紫外检测器检测,外标法定量。

3试剂和材料

除非另有说明,本方法所用试剂均为分析纯,水为GB/T规定的一级水。

3.1试剂

3.1.1氨水(NH3·H2O)。

3.1.2亚铁氰化钾[K4Fe(CN)6·3H2O]。

3.1.3乙酸锌[Zn(CH3COO)2·2H2O]。

3.1.4无水乙醇(CH3CH2OH)。

3.1.5正己烷(C6H14)。

3.1.6甲醇(CH3OH):色谱纯。

3.1.7乙酸铵(CH3COONH4):色谱纯。

3.1.8甲酸(HCOOH):色谱纯。

3.2试剂配制

3.2.1氨水溶液(1+99):取氨水1mL,加到99mL水中,混匀。

3.2.2亚铁氰化钾溶液(92g/L):称取g亚铁氰化钾,加入适量水溶解,用水定容mL。

3.2.3乙酸锌溶液(g/L):称取g乙酸锌溶于少量水中,加入30mL冰乙酸,用水定容至mL。

3.2.4乙酸铵溶液(20mmol/L):称取1.54g乙酸铵,加入适量水溶解,用水定容至mL经0.22μm水相微孔滤膜过滤后备用。

3.2.5甲酸-乙酸铵溶液(2mmol/L甲酸+20mmol/L乙酸铵):称取1.54g乙酸铵,加入适量水溶解,再加入75.2μL甲酸,用水定容至mL,经0.22μm水相微孔滤膜过滤后备用。

3.3标准品

3.3.1苯甲酸钠(C6H5COONa,CAS号:-32-1),纯度≥99.0%;或苯甲酸(C6H5COOH,CAS号:65-85-0),纯度≥99.0%,或经国家认证并授予标准物质证书的标准物质。

3.3.2山梨酸钾(C6H7KO2,CAS号:-00-1),纯度≥99.0%;或山梨酸(C6H8O2,CAS号:-44-

1),纯度≥99.0%,或经国家认证并授予标准物质证书的标准物质。

3.3.3糖精钠(C6H4CONNaSO2,CAS号:-44-9),纯度≥99%,或经国家认证并授予标准物质证书的标准物质。

3.4标准溶液配制

3.4.1苯甲酸、山梨酸和糖精钠(以糖精计)标准储备溶液(mg/L):分别准确称取苯甲酸钠、山梨酸钾和糖精钠0.g、0.g和0.g(精确到0.g),用水溶解并分别定容至mL。于4℃贮存,保存期为6个月。当使用苯甲酸和山梨酸标准品时,需要用甲醇溶解并定容。

注:糖精钠含结晶水,使用前需在℃烘4h,干燥器中冷却至室温后备用。

3.4.2苯甲酸、山梨酸和糖精钠(以糖精计)混合标准中间溶液(mg/L):分别准确吸取苯甲酸、山梨酸和糖精钠标准储备溶液各10.0mL于50mL容量瓶中,用水定容。于4℃贮存,保存期为3个月。

3.4.3苯甲酸、山梨酸和糖精钠(以糖精计)混合标准系列工作溶液:分别准确吸取苯甲酸、山梨酸和糖精钠混合标准中间溶液0mL、0.05mL、0.25mL、0.50mL、1.00mL、2.50mL、5.00mL和10.0mL,用水定容至10mL,配制成质量浓度分别为0mg/L、1.00mg/L、5.00mg/L、10.0mg/L、20.0mg/L、50.0mg/L、mg/L和mg/L的混合标准系列工作溶液。临用现配。

3.5材料

3.5.1水相微孔滤膜:0.22μm。

3.5.2塑料离心管:50mL。

4仪器和设备

4.1高效液相色谱仪:配紫外检测器。

4.2分析天平:感量为0.g和0.g。

4.3涡旋振荡器。

4.4离心机:转速r/min。

4.5匀浆机。

4.6恒温水浴锅。

4.7超声波发生器。

5分析步骤

5.1试样制备

取多个预包装的饮料、液态奶等均匀样品直接混合;非均匀的液态、半固态样品用组织匀浆机匀浆;固体样品用研磨机充分粉碎并搅拌均匀;奶酪、黄油、巧克力等采用50℃~60℃加热熔融,并趁热充分搅拌均匀。取其中的g装入玻璃容器中,密封,液体试样于4℃保存,其他试样于-18℃保存。

5.2试样提取

5.2.1一般性试样准确称取约2g(精确到0.g)试样于50mL具塞离心管中,加水约25mL,涡旋混匀,于50℃水浴超声20min,冷却至室温后加亚铁氰化钾溶液2mL和乙酸锌溶液2mL,混匀,于r/min离心5min,将水相转移至50mL容量瓶中,于残渣中加水20mL,涡旋混匀后超声5min,于r/min离心5min,将水相转移到同一50mL容量瓶中,并用水定容至刻度,混匀。取适量上清液过0.22μm滤膜,待液相色谱测定。

注:碳酸饮料、果酒、果汁、蒸馏酒等测定时可以不加蛋白沉淀剂。

5.2.2含胶基的果冻、糖果等试样

准确称取约2g(精确到0.g)试样于50mL具塞离心管中,加水约25mL,涡旋混匀,于70℃水浴加热溶解试样,于50℃水浴超声20min,之后的操作同5.2.1。

5.2.3油脂、巧克力、奶油、油炸食品等高油脂试样准确称取约2g(精确到0.g)试样于50mL具塞离心管中,加正己烷10mL,于60℃水浴加热约5min,并不时轻摇以溶解脂肪,然后加氨水溶液(1+99)25mL,乙醇1mL,涡旋混匀,于50℃水浴超声20min,冷却至室温后,加亚铁氰化钾溶液2mL和乙酸锌溶液2mL,混匀,于r/min离心5min,弃去有机相,水相转移至50mL容量瓶中,残渣同5.2.1再提取一次后测定。

5.3仪器参考条件

5.3.1色谱柱:C18柱,柱长mm,内径4.6mm,粒径5μm,或等效色谱柱。

5.3.2流动相:甲醇+乙酸铵溶液=5+95。

5.3.3流速:1mL/min。

5.3.4检测波长:nm。

5.3.5进样量:10μL。

注:当存在干扰峰或需要辅助定性时,可以采用加入甲酸的流动相来测定,如流动相:甲醇+甲酸-乙酸铵溶液=8+92。

5.4标准曲线的制作

将混合标准系列工作溶液分别注入液相色谱仪中,测定相应的峰面积,以混合标准系列工作溶液的质量浓度为横坐标,以峰面积为纵坐标,绘制标准曲线。

5.5试样溶液的测定

将试样溶液注入液相色谱仪中,得到峰面积,根据标准曲线得到待测液中苯甲酸、山梨酸和糖精钠(以糖精计)的质量浓度。

6分析结果的表述

试样中苯甲酸、山梨酸和糖精钠(以糖精计)的含量按式(1)计算:

…………………………(1)

式中:

X———试样中待测组分含量,单位为克每千克(g/kg);

ρ———由标准曲线得出的试样液中待测物的质量浓度,单位为毫克每升(mg/L);

V———试样定容体积,单位为毫升(mL);

m———试样质量,单位为克(g);

———由mg/kg转换为g/kg的换算因子。

结果保留3位有效数字